国家卫健委刚刚发布的《医疗机构新冠病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》中在“性能验证”和“其他要求”部分均提出了建议选用高灵敏核酸检测试剂（检测限≤500拷贝/mL）的要求。
事实上先前多个技术规范和工作通知中均已明确提出类似建议（选择灵敏度高的检测试剂）[1-3]，但此文件中是第一次明确指出高灵敏检测试剂检出限临界数值为500拷贝/mL。对于目前国家药品监督管理局（NMPA）已批准的新冠病毒RT-PCR法检测试剂而言，大部分试剂说明书中宣称的检测灵敏度是可以满足此要求的，见表1。
表1 十五种试剂盒的宣称检测限
但是对于少量试剂来说，其说明书中所宣称的灵敏度无法满足此要求，这个文件出台让他们挺被动，这不立马有厂商声明已完成试剂检出限变更注册，也有几位老师私下问我该怎么办？那么暂且先不管这个问题。我们先来想想，这些试剂宣称的检出限就是其真实检出限吗？先前我们对NMPA首批批准的6种RT-PCR试剂最低检测限的比较结果表明并非如此[4]。而目前NMPA已经批准了十几种试剂，其中大部分试剂已在临床广泛应用，那么它们实际检出限之间是否存在差异？目前也没看到这些数据，正好11月份我们做过相关评估，借此机会把评估结果简单介绍一下，以供各位感兴趣的同行参考。
样本：新冠病毒核糖核酸基因组标准物质（编号：GBW(E)091099）购自中国计量院，其为纯化后的人源核糖核酸基因组， ORF1ab、N 和E基因拷贝数浓度分别为6.89×105、1.36×106、8.04×105拷贝/mL（数字PCR定值）。方法：将标准物质（以ORF1ab基因浓度为准）2倍倍比稀释，参考试剂盒最低检测限制备若干梯度浓度样品，每浓度重复20次检测，48h内完成所有检测，结果判定以厂家说明书中要求为准，以具有95%阳性检出率的最低浓度水平作为试剂盒的最低检测限。
实验结果：
注：为避免产生误解，检测结果中厂家均以字母代替，且顺序和表1中并不相同，请大家勿对号入座。
实验结论：
- 不同厂家试剂实际检测限间存在差异（最大8倍），其中最低100拷贝/mL，最高800拷贝/mL（以中国计量院标准物质的ORF1ab基因定值结果为准）。
不同厂家所宣称检出限与其实际检出限并不一致，约70%厂家试剂真实检出限符合或超出其宣称检出限。
上述结论可以回答先前所提问题，就是试剂间真实检出限确实存在差异，且试剂宣称检出限可能与其真实检出限有较大不同。因此，建议实验室选择试剂前应先选取几种试剂进行比较，选取性能最为优良的一种用于后续检测。当然，实验室也应对所选试剂进行性能验证，且须由本实验室操作人员完成。此外，对于本次实验未达到500拷贝/mL要求的部分试剂，其差异也可能并非试剂本身所致，而是由于试剂批间差原因造成（本次评估每种试剂仅使用同一批次）。因此，建议大家严格按照相关要求进行试剂批间差验证，尽可能保证检测试剂性能良好，以保证检测结果准确可靠。
参考文献
[1]中华人民共和国国家卫生健康委员会 (2020-07-22) 关于印发新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引的通知.
[2]中华人民共和国国家卫生健康委员会(2020-08-19) 关于印发新冠病毒核酸10合1混采检测技术规范的通知.
[3]中华人民共和国国家卫生健康委员会(2020-11-09) 关于加强外送样本新冠病毒核酸检测质量管理工作的通知.
[4]Wang X, Yao H, Xu X, et al. Limits of Detection of Six Approved RT-PCR Kits for the Novel SARS-coronavirus-2(SARS-CoV-2). 2020，Clin Chem 66 (7):977-979.